小鼠前列腺肿瘤组织属于致密、纤维含量高的类型样品。手动研磨特别考验手法；这次我们应用机器自动化解离，看看这处理效果到底能不能打——实验全程使用上海净信JX-DLDXB-4单细胞悬液制备仪。

实验前的准备

1. 样本：小鼠前列腺肿瘤组织，约100mg。肿瘤组织比正常组织更致密，剪块的时候尽量切小一点，别整块往里塞，不然解离效率会受影响。

2. 试剂：配套单细胞悬液制备试剂盒。试剂盒必须放在低温保存，做实验前提前拿出来解冻，千万别临时抱佛脚。试剂盒里一般包含消化酶和缓冲液，按说明书比例配好就行。

3. 耗材：手术剪刀、眼科镊、培养皿、移液枪、离心管、滤网。

4. 实验仪器：净信JX-DLDXB-4单细胞悬液制备仪。这款机器是四通道设计，可以同时处理多个样本，通量不错。仪器自带几种预设程序，针对不同的组织类型做了优化，可以直接调用，不用自己从零摸索参数。

小鼠肿瘤组织单细胞悬液制备的实验操作步骤

整个实验操作过程其实不复杂，我这次用的是仪器内置的"小鼠肿瘤程序1"，具体流程如下：

1. 样本处理：先把小鼠前列腺肿瘤组织取出来，放在培养皿里，用手术剪刀剪成小块。这一步越碎越好，但也不用太强迫症，机器后面还有机械解离，主要让消化酶能充分渗透进去就行。剪完后转移到消化管中，加入配好的消化酶混合液。

2. 上机解离：将消化管装入仪器的固定槽位，确认管盖卡紧。在触摸屏上选择"小鼠肿瘤程序1"，这个程序的温度和转速曲线是针对肿瘤组织优化过的，不用自己调。点开始后机器会自动升温，然后进行恒温酶解，同时伴随机械震荡，让组织在酶和机械力的双重作用下逐渐打散。

3. 过滤与清洗：解离完成后取出消化管，先用移液枪轻轻吹打几下，把管壁上粘的细胞冲下来。然后用细胞滤网过滤，把没解离开的组织碎片和细胞团块筛掉。过滤后的细胞悬液转入离心管，低速离心清洗，去掉多余的消化酶和碎片。

4. 重悬与计数：清洗后的细胞沉淀用PBS或培养基重悬，轻轻吹打混匀。然后用血球计数板或者自动细胞计数仪测一下浓度和活率，确保后续上流式的细胞数量够用。活率一般要在85%以上，太低的话分选效果会打折扣。

单细胞悬液制备过程中的实验注意事项

做下来有几个地方容易翻车，需要提前避一下雷：

1. 试剂盒保存和解冻：试剂盒一定要低温冻存，不能反复冻融。建议提前一晚放到4℃解冻，或者实验当天拿出来室温化冻。反复冻融会导致酶活性下降，解离效果直接打折扣。

2. 组织块大小：别嫌麻烦，组织块一定要剪碎。大块组织进去，机器再强也啃不动，最后过滤时堵滤网，细胞得率低，还耽误时间。

3. 清洗要克制：清洗是为了去掉碎片和残留酶，但次数太多会损失细胞。尤其肿瘤组织解离出来的细胞相对脆弱，离心转速过高或者时间过长都会导致细胞破裂。

4. 程序选择：JX-DLDXB-4单细胞制备仪内置了多种程序，对应不同组织类型。小鼠肿瘤样本就用"小鼠肿瘤程序1"，别套用其他程序。程序内部参数包括温度曲线、振荡频率、时间都是匹配好的，自己乱调反而容易出问题。

结果总结

这次实验用机器解离下来的细胞悬液，整体状态比我之前手动研磨的要均匀很多。细胞得率稳定，碎片率明显降低，最重要的是重复性好。手动研磨每次结果波动挺大，全看手感和运气，机器做完几次，数据之间的偏差小了很多，后续上流式分选也省了不少心。

上海净信JX-DLDXB-4单细胞悬液制备仪，对于前列腺肿瘤这种致密组织，解离效率确实在线。预设程序省掉了调参的时间，四通道并行处理，通量也够用。如果你实验室也做小鼠肿瘤组织的单细胞解离，这台机器可以列入考虑清单，至少能把重复性差这个老大难问题给解决掉。